单克隆抗体次筛选是制备过程中的关键步骤，涉及抗原特异性、抗体分泌量和细胞生长特性等多方面评估。通过精细操作和科学流程，确保筛选出特性优良的杂交瘤细胞株，为后续研究与应用奠定坚实基础。下面一起来看下单克隆抗体次筛选的方法：
次筛选
首先，在已免疫过的B淋巴细胞（即效应B细胞）和骨髓瘤细胞进行杂交时，可能出现的情况应该先弄清楚。
如果只考虑两两融合，可能的情况有：（效应）B淋巴细胞和（效应）B淋巴细胞的融合；（效应）B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合（即杂交瘤细胞）；骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合（即瘤瘤细胞）。
类细胞在体外培养的条件下，因为无法无限增殖，终死亡，因此，筛选的关键是限制第二类细胞的增殖。科学家在设计实验时，已经考虑到这方面问题，所以他们选择的瘤细胞是有遗传缺陷的，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷（TK－）或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT－）缺陷。
筛选的目的：获得杂交瘤细胞。
筛选的方法： 用选择性培养基来完成，即HAT培养基。
加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）及胸腺嘧啶核苷（T）的培养基称HAT培养基。
其中，氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径。主要途径阻断后，依靠应急途径即在HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和TK（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA，缺少其中一种，DNA合成不能发生。
用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞，细胞内均无TK或HGPRT，所以单个或融合骨髓瘤细胞在HAT培养液中将死亡。B细胞虽然有HGPRT和TK，但在体外通常培养条件下，尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。
因此，只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖。
即:
①淋巴细胞：不能生长，5到7天死亡；DNA的主要合成途径被A阻断。
②骨髓瘤细胞：不能生长，5到7天死亡；HGPRT缺乏，DNA合成的旁路途经受阻。
③骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的HGRT将H合成为嘌呤碱并终与T一起合成DNA从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息，从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力。
由于通过以上方法选择出杂交瘤细胞，虽然都是杂交瘤细胞，但可能是同一抗原的不同抗原决定簇刺激产生的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体，所以，需要第二次筛选。
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