单克隆抗体技术的基本原理

 

单克隆抗体（monoclonal antibody, mAb）是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。单克隆抗体在生物医学研究、疾病诊断和某些疾病治疗（如传染病和癌症）中是十分重要的工具。

 

当前常见的单克隆抗体制备技术主要有杂交瘤、噬菌体抗体库和单个B细胞技术。其中，杂交瘤技术是将免疫小鼠的B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选具有特异性抗体分泌功能的杂交瘤细胞，进而生产纯化获得单克隆抗体。噬菌体抗体库技术是利用基因工程技术将抗体的基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，通过与靶蛋白的结合，完成噬菌体展示抗体的筛选。单个B细胞技术是根据每个B细胞只含有一对功能性的重链和轻链，每个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，可以直接从单个B细胞中扩增抗体基因获得单克隆抗体。

 

 

单克隆抗体技术流程

 

一、杂交瘤技术制备单克隆抗体

 

杂交瘤技术是经典的单克隆抗体制备技术，具体流程为：

1) 抗原制备；

2）动物免疫；

3）免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞；

4）筛选杂交瘤细胞获得分泌目标抗体的阳性单克隆杂交瘤细胞；

5）扩大培养阳性单克隆杂交瘤细胞；

6）单克隆抗体大量制备。

 

义翘神州建立了杂交瘤开发技术平台，已成功开发了19000株以上杂交瘤阳性克隆，可以根据客户的终应用需求，制定个性化的抗原设计、动物免疫、克隆筛选及抗体鉴定方案，生产高质量的单克隆抗体，满足客户的不同需求。

 

二、噬菌体抗体库技术制备单克隆抗体

 

噬菌体抗体库技术也是一种制备单克隆抗体的方法。通常首先是从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴细胞，提取mRNA并反转录为cDNA，以扩增所有的VH和VL片段。然后构建Fab或scFv等形式的抗体组合文库，使外源抗体基因表达的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体外壳蛋白pIII或pVIII的N端。 ，经过“吸附-洗涤-扩增”过程筛选并富集特异性抗体。

 

噬菌体抗体库开发平台包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州能为客户提供个性化的抗体定制服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属的抗体发现服务。

 

三、单B细胞抗体技术制备单克隆抗体

 

单个B细胞抗体技术是独立于杂交瘤技术和噬菌体展示技术的、新一代的单克隆抗体开发技术。其技术流程是从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性B细胞，通过单细胞PCR技术从单个抗体分泌B细胞中扩增IgG重链和轻链可变区基因，然后在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。该技术保留了轻重链可变区天然配对，具有基因多样性好、效率高和所需细胞数量少的优点。

义翘神州拥有流式单B细胞和Beacon?单B细胞两大技术平台，可提供一站式的单B细胞抗体制备服务，包括从免疫原制备到单个B细胞分选、鉴定、及抗体生产等步骤。