非标记（Label-free）交互分析是科学家用于研究生物分子之间相互作用的重要方法，这些系统主要基于光学效应的技术－表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)和生物膜层表面干涉技术（bio－layer interferometry, BLI），可直接检测分子间相互作用并进行实时监测。
一、亲和力动态测定方法-表面等离子共振法（SPR）是一种生物大分子相互作用分析（biomolecular interactionanalysis, BIA）技术，这种技术基于表面等离子共振的物理光学现象的生物传感分析技术，不必使用荧光标记或同位素标记，从而让保持了生物分子的天然活性，而且可实时检测抗原-抗体等生物大分子相互作用的全过程。
SPR光谱可以实时监测传感芯片表面液相折射率的变化，而这一变化和传感芯片表面所结合的生物分子的质量成正比，用共振单位（Responseunit，RU）相对时间来表示。因此，通过分析反应过程中各时刻的SPR光谱，可在非标记的情况下监测生物分子间的相互作用。
SPR技术特点：
★ Lable-Free技术，无需利用荧光素、同位素等分子检测
★ Real-Time技术，可直接、实时监测相互作用的全过程
★ 获得分子相互作用的亲和力及热动力学信息
★ 光路不经过样品，不受样品颜色影响
★ 样品消耗低，自动化程度高
结果交付
★ 亲和力（定量分析）：结合常数（Ka）、解离常数（Kd）和亲和常数（KD）
★ 电子图片&完整实验，包括实验步骤、使用试剂、仪器、软件检索参数等
二、亲和力动态测定方法-竞争ELISA法
抗原抗体的结合是一个可逆的反应：A+B?AB（A表示抗体，B表示抗原，AB表示抗原抗体结合物）。
当反应达到平衡时，解离常数Kd=[A][B]/[AB]，[AB]表示反应平衡时抗原抗体结合物的浓度，[A]表示反应平衡时游离抗体的浓度，[B]表示反应平衡时游离抗原的浓度。
①当反应体系中抗体很少，而抗原过量时，反应平衡后[AB]>[A]；
②当反应体系中抗原量很少，而抗体过量时，反应达到平衡后[AB]<[A]；
③当反应体系中抗原抗体的量刚好合适时，反应达到平衡后处于半饱和状态，此时[AB]=[A],则Kd=[A][B]/[AB]=[B]。
在半饱和状态下，如果抗体的浓度很低，反应消耗的抗原很少，则反应后游离的抗原浓度[B]约等于总的抗原浓度[B]总，此时Kd=[B]≈[B]总。因此，只要在抗体浓度较低的情况下，找到可以在反应平衡后达到半饱和状态的抗原浓度[B]总，便可以得到解离常数。
酶标抗体建议不要使用HRP偶联抗体，竞争ELISA法测抗体亲和力实验是在抗体浓度很低的条件下进行，利用HRP偶联抗体并不能很好的获得信号。为了获得更好的信号，建议使用AP偶联的鼠单克隆抗体。
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