离子交换层析(IEX)是一种主要基于蛋白净电荷的色谱分离方法，通常用于追踪脱酰胺和琥珀酰亚胺的形成。IEX有两种类型：阳离子交换和阴离子交换层析法。当缓冲液pH值高于此IP时，蛋白带负电（阴离子）；当pH值低于此IP时，蛋白带正电（阳离子）。

 

所有蛋白都表现出净电荷，这取决于蛋白氨基酸组成和任何共价连接的修饰。蛋白净电荷受溶解它的溶剂pH所影响，因为溶剂会与蛋白进行氢离子交换。通常情况下，蛋白与IEX的结合必须通过反复试验来确定，使用一系列pH值的溶剂以确定蛋白保留的pH。通常溶剂的pH值与pI相差约一个pH单位就足以实现蛋白结合。

 

 

离子交换层析（IEX）具体操作步骤：

 

平衡

 

步是固定相的平衡。当达到平衡时，所有的固定相带电基团都与可交换的平衡离子结合，如氯或钠。选择起始缓冲液的pH和离子强度，以确保目标蛋白与介质的结合。

 

上样和清洗

 

第二步的目标是结合目标分子，并清洗出所有未结合的物质。

 

洗脱

 

随着离子强度的增加，在选定的pH值下净电荷的蛋白将从柱子上洗脱。同样地，在一定pH值下电荷的蛋白被保留得牢固，并且在被洗脱。

 

再生

 

用高离子强度的缓冲液进行清洗，使色谱柱再生，并去除任何仍结合的分子。然后在开始下运行之前，色谱柱需要在起始缓冲液中重新平衡。

 

以上是对离子交换层析原理和步骤的详解，具体来源可参看：https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec