实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）是一种革命性的技术，能够在PCR扩增过程中实时监测反应进程，从而实时收集数据。与传统的PCR方法不同，qPCR不依赖于PCR循环结束后的产物量，而是通过观察循环中首次检测到目标扩增的时间点来确定结果。这种方法的灵敏度极高，目标核酸的起始拷贝数越高，荧光的显著增加就越快被观察到。相比之下，终点法检测（也称为“读板检测”）则仅测量PCR循环结束时的产物累积量。

 

那么荧光定量pcr是检查什么的？荧光定量pcr利用具有热循环功能及荧光染料筛查能力的仪器，检测反应过程中荧光的变化。

 

荧光定量PCR是分子生物学实验中的一项重要手段，同时也是检验科常用的技术。其原理是利用具有热循环功能及荧光染料筛查能力的仪器，检测反应过程中荧光信号的变化，从而对核糖核酸、DNA、RNA等目标分子进行定量检测。在妇科领域，HPV检测是荧光定量PCR的常用应用之一。通过荧光显影技术，可以方便地监测PCR过程，并准确地计算出体内HPV感染的量。

 

通过荧光定量PCR检测HPV，不仅可以观察阳性或阴性的结果，还可以地测量HPV感染的量以及拷贝数。这对于筛查宫颈癌等妇科疾病具有重要意义。除了HPV检测外，荧光定量PCR还可广泛应用于其他领域，如病毒筛查、基因表达分析等。总之，荧光定量PCR技术的出现为分子生物学实验和医学诊断带来了革命性的变革，极大地提高了检测的准确性和效率。

 

荧光定量PCR的应用

分子生物学研究

 

1 核酸定量分析 对传染性疾病进行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的检测 , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 转基因动植物基因拷贝数的检测，RNAi 基因失活率的检测等。

 

2 基因表达差异分析 比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异 ( 如药物处理、物理处理、化学处理等 ) ，特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证

 

3 SNP 检测 检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义，因分子信标结构的巧妙性，一旦SNP 的序列信息是已知的，采用这种技术进行高通量的 SNP 检测将会变得简单而准确。

 

4 甲基化检测 甲基化同人类的许多疾病有关，特别是癌症， Laird 报道了一种称作 Methylight的技术，在扩增之前先处理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影响，用特异性的引物和 Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的 DNA ，这种方法不仅方便而且灵敏度更高。

 

医学研究

 

5 产前诊断 人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗，到目前为止，还只能只能通过产前监测，减少病婴出生，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少 X连锁遗传病患儿的出生，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法，易为孕妇所接受。

 

6 病原体检测 采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、 结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。

 

7 药物疗效考核 对乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达，干扰素治疗作用不敏感，而HCV低滴度，干扰素作用敏感；在拉米夫定治疗过程中，HBV- DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平，则提示病毒发生变异。

 

8 肿瘤基因检测 尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受。癌基因的表达增加和突变，在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量 PCR不但能有效地检测到基因的突变，而且可以准确检测癌基因的表达量。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测。

 

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