义翘神州的哺乳动物瞬时表达系统以HEK293细胞和CHO细胞为表达宿主,可提供灵活的服务以满足不同的定制需求,包括标签去除、内毒素去除、SEC-HPLC检测、糖基化分析等。专有的高密度细胞培养技术,结合自主产权的转染试剂和培养基配方,以及高效表达载体,实现降本增效,提高表达成功率,帮助客户节省成本。下面是关于哺乳动物细胞瞬时表达的常见问题解答:
问题一:如何选择哺乳动物瞬时表达系统,HEK293 还是 CHO?
由于具有易于转染、蛋白表达水平高和工作流程稳定的特点,因此人胚胎肾细胞 (Human Embryonic Kidney 293 Cell, HEK293) 是哺乳动物细胞蛋白瞬时转染的细胞系。但当开发治疗性蛋白或者治疗性抗体的商业化重组生产时,中国仓鼠卵巢细胞 (Chinese Hamster Ovary Cell, CHO) 是的细胞系。大约 70% 获批的生物治疗蛋白是在稳定转染的CHO细胞中产生的。
HEK293:
? 易转染,转染效率高
? 适用于悬浮培养
? 瞬时表达
? 可靠且灵活的细胞生长
CHO:
? 难转染,转染效率低
? 适用于悬浮培养
? 瞬时表达和稳定表达
? 稳转重组蛋白产量高和Qp (细胞单位生产率) 高
问题二:什么情况下建议选择哺乳动物表达系统?
哺乳动物表达系统能够进行蛋白质折叠和完整的翻译后修饰(例如糖基化、磷酸化等)。哺乳动物细胞表达的重组蛋白,其分子结构、理化结构和生物学功能大多接近于天然蛋白。当目的蛋白属于这种情况,推荐使用哺乳动物表达系统。
问题三:HEK293和HEK293T有什么区别?
在原代人胚肾细胞转入了一段修改后的5型腺病毒DNA片段,得到的细胞即为HEK293细胞。HEK293的衍生株包括HEK293T、HEK293E、HEK293A和HEK293F 等。在HEK293细胞中转入SV40 (Simian Virus 40) 大T抗原,得到的细胞即为HEK293T细胞。HEK293T具有新霉素抗性和对温度敏感。
HEK293T细胞能稳定表达SV40大T抗原。包含SV40复制起点的质粒能够在该细胞系中显著扩增,从而促进表达载体的扩增,促进蛋白的表达。HEK293T细胞除了可用于各类基因表达及蛋白生产,还可用于病毒蛋白生产。
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