什么是抗体纯化？
抗体纯化是指从抗血清（pAb）、腹水或杂交瘤细胞系（mAb）细胞培养上清液中提取抗体的过程。纯化后的抗体适用于多种应用。该过程可以在提供抗体纯化服务的实验室中进行，如果有必需的设备和工具，也可以自行纯化。如研究人员担心原始研究的完整性受到破坏，可在实验室中进行纯化，确保研究快速进行。
抗体的主要来源之一是在动物体内生成的抗血清。在这种情况下，反复向动物体内注射抗原，直到抗体开发完成为止，其血液用于制备抗血清，经纯化后可获得多克隆抗体。抗体的另一个来源是克隆细胞，其作为相同细胞群的一部分生成抗体；这种方法用于大规模生产单克隆抗体。查看更多有关“单克隆抗体纯化”的信息。
抗体纯化的基本流程？
①前期准备
选择适当的来源:根据需要选择合适的来源,如小鼠、兔子等。
免疫原制备:根据需要制备相应的免疫原。
动物免疫:将免疫原注射到动物体内进行免疫。
②收集血清
采集血液：在动物免疫后，采集相应量的血液
离心分离血清：将采集的血液离心分离出血清。
③初步纯化
蛋白A亲和层析：将血清通过蛋白A亲和层析柱进行初步纯化。蛋白A是与IgG亚类结合较紧密的亲和素。
洗脱：通过改变pH值或盐浓度等条件，将与蛋白A柱结合的IgG洗脱下来。
④中期纯化
离子交换层析：将初步纯化后的IgG通过离子交换层析柱进行中期纯化。选择适当的离子交换树脂，使得IgG可以被结合并随后洗脱。
洗脱：通过改变盐浓度或pH值等条件，将与离子交换树脂结合的IgG洗脱下来。
⑤后期纯化
凝胶过滤层析：将中期纯化后的IgG通过凝胶过滤层析柱进行后期纯化。选择适当的凝胶过滤树脂，使得IgG可以在某一分子量范围内被分离出来。
洗脱：将分离出来的IgG进行洗脱，并进行终检测。
抗体纯化方法：
抗体纯化用于从血清中分离多克隆抗体，或从腹水或培养上清液中分离单克隆抗体。我们可以采用多种方法纯化抗体，可纯化从粗制到具有高度特异性的抗体。
利用制备好的抗原使动物产生免疫反应，随后生成结合这种抗原的特异性抗体。从血清或杂交瘤细胞系（从免疫动物组织中制备）中纯化的抗体可直接用于（或在用酶或荧光标记物标记后）蛋白免疫印迹、ELISA等抗原检测及多种其他应用。单克隆抗体纯化工艺通常涉及捕获、中间纯化和精纯等两步或三步纯化方法。
①抗体捕获方法
因为抗体具有可预测的结构，包括相对不变的结构域，不管抗体对抗原的特异性如何，都有可能识别出某些能与抗体结合的蛋白配体。蛋白A、蛋白G和蛋白L是三种细菌蛋白，具有良好的抗体结合特性。这些蛋白通过重组制备，通常用于多物种的关键抗体类型的亲和纯化。这些抗体结合蛋白可固定在串珠状琼脂糖树脂上。
②抗体精纯方法
利用亲和层析法的单个快速捕获步骤足以达到研究目的所需产品的纯度和产品数量。抗体或其片段可以充分纯化以供进一步使用，且精纯步骤足以去除多余杂质。如果不能使用亲和层析法达到需要的更高纯度，则应在精纯方法中使用其他替代技术。
离子交换（IEX）层析法
离子交换（IEX）层析法是根据电荷分离蛋白质的方法。可以制备色谱柱用于阴离子交换或阳离子交换。阴离子交换色谱柱包含带有正电荷的固定相，可吸引带有负电荷的蛋白质。阳离子交换色谱柱则相反，带有负电荷的串珠可吸引带正电荷的蛋白质。调整色谱柱中的pH值对目标抗体进行洗脱，以改变或中和每种蛋白质的带电官能团。
凝胶过滤（GF）层析法
凝胶过滤（GF）层析法，也称为体积排阻色谱法，可从小分子蛋白质中分离大分子蛋白质，因为较大的分子能够更快地通过色谱柱中的交联聚合物。大分子抗体不适合聚合物的孔，而小分子抗体适合。小分子抗体并不是直接通过色谱柱，需要花费更长时间，洗脱液收集在一系列管中，根据洗脱时间分离抗体。凝胶过滤是浓缩抗体样本的有效工具，因为目标抗体的收集比初加入色谱柱的洗脱体积更小。由于其成本低廉，在大规模抗体制备时可使用同样的过滤技术。
疏水相互作用（HIC）色谱法
疏水相互作用（HIC）色谱法通常在单克隆抗体纯化中作为精纯步骤。HIC为离子交换色谱法提供了正交选择性，可作为有效步骤用于总间隙和宿主细胞蛋白制备。HIC基于固定相上的疏水（脂族或芳香族）配体与蛋白质表面的疏水基团之间的相互作用。高离子强度缓冲液增强了这种相互作用，使得HIC在用硫酸铵沉淀或IEX期间在高盐中洗脱后成为了的纯化步骤。
抗体纯化是制备高质量抗体的重要步骤之一。本文介绍了抗体纯化的基本流程，包括前期准备、收集血清、初步纯化、中期纯化和后期纯化等步骤。在实际操作中，应根据具体情况选择适当的方法和条件，以获得高纯度的抗体。
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