抗体经过酶标记、铁蛋白标记或通过胶体金标记获得标记抗体，是免疫电镜样品制备的一种方法，用于观察抗原抗体免疫复合物方面研究的手段。免疫标记技术是将一些既易测定又具有高度敏感性的物质标记到特异性抗原或抗体分子上，通过这些标记物的增强放大效应来显示反应系统中抗原或抗体的性质与含量。抗体标记主要是用于抗原的定位分析，在某些情况下，也可以对混杂有大量其他分子的样本中的抗原进行定量检测。由于抗体与其相应抗原具有很高的亲和力，因此带有易识别标记物的抗体可以定位分析抗原，并且是一种理想的快速价廉的定量测定方法。

 

常见的抗体标记方法：

 

和所有蛋白质一样，抗体也是由氨基酸组成的。理论上，通过大多数氨基酸可以实现生物偶联。以下内容介绍了几种基于赖氨酸残基的抗体偶联和标记技术。

 

 

①NHS（琥珀酰亚胺）酯法

应用广泛的荧光染料（如罗丹明衍生物）是采用这种方法对抗体进行偶联。通常在磷酸盐缓冲液中进行，随后与未标记的染料在柱上进行分离。该方法的主要缺点是，由于酯类对水分敏感，酯类的稳定性差。因此，反应结束后，标记抗体应立即使用。

 

吉妥珠单抗（Gemtuzumab ozogamicin, Mylotarg?）是全球范围内获批上市的抗体偶联药物（ADC）。半合成的卡奇霉素衍生物具有NHS酯，以便将卡奇霉素与人源化IgG4的赖氨酸残基偶联。然而，由于患者的临床获益不足，Mylotarg?已于2010年退市。

 

 

②异硫氰酸盐法

这种方法主要用于异硫氰酸荧光素（FITC）染料的偶联，广泛用于荧光标记蛋白和抗体的制备。异硫氰酸盐比NHS更稳定，但也更难制备，而且利用该方法，标记的反应效率可能会降低。与NHS法一样，应在反应结束后通过层析法去除多余染料。

 

 

③碳二亚胺法

碳二亚胺衍生化合物将蛋白质上的羧基转换为反应中间体，可与赖氨酸发生反应。碳二亚胺的高反应性意味着它们可用于使用相对惰性的材料（如磁性或金颗粒）标记抗体。常用的碳二亚胺为EDC。NHS有时可被添加至反应中，以辅助产生相对稳定的中间体。

 

该方法操作简单，但与NHS一样，EDS具有吸水性，因此，标记后抗体需立即使用。

 

 

④高碘酸盐法

这种方法可用于制备特异性的HRP标记抗体。高碘酸盐通过产生与赖氨酸残基相互作用的醛分子来激活HRP。HRP本身只有少量的赖氨酸残基，因此酶聚合的影响不大。HRP和抗体之间的键是可逆的，可通过添加氰基硼氢化钠使其保持稳定。

 

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