在生物医学领域，多克隆抗体是一种非常重要的工具。多克隆抗体是由免疫动物产生的一类具有识别多种抗原表位的抗体，具有广泛的应用价值。制备多克隆抗体的方法有多种，其中常用的是免疫接种和杂交瘤技术。本文将介绍多克隆抗体的制备方法及流程。
多克隆抗体的制备方法主要是通过动物免疫，刺激宿主产生大量抗体。通常选用兔子和山羊作为免疫动物，因为动物反应良好，能提供足够数量的血清。用于免疫的动物应适龄、健壮、无感染性疾病、好为雄性，此外还要注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。一般采用皮下或背部多点皮内注射免疫原，多次免疫之后，激发动物机体免疫系统产生抗体，获取动物高免血清获得抗体；进一步通过纯化及验证后才可以使用。
利用兔子制备多克隆抗体涉及4个关键步骤，具体概述如下：
步骤1：抗原制备
蛋白抗原或多肽抗原合成是多抗制备的步。目标抗原的纯度对于抗体来说很关键，直接影响终多克隆抗体的质量。抗原中的杂质（＜1%）也可能具有免疫原性（例如许多细菌抗原），可能导致抗体识别杂质，而不是目标抗原。
义翘神州拥有重组蛋白表达平台，在CHO、HEK293和大肠杆菌中有着丰富的重组蛋白表达经验，可提供高效的抗原制备服务。
步骤2：动物免疫
多克隆抗体制备时，如何选择动物取决于这3个方面：所需抗血清的数量、抗原物种与免疫动物之间的亲缘关系以及免疫原制备的经验。兔子通常是多抗制备的，体积大，每次可抽取多达25mL的血清，对兔子本身无显著的不良影响。
免疫佐剂是多抗制备时用于增强机体免疫应答的辅助物质。弗氏佐剂是一种常用的免疫佐剂，分为完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂。在佐剂存在的情况下，将蛋白抗原通过肌肉注射、皮内注射或皮下注射的方式注入选定种类的动物体内。初次免疫的4~8周后，开始进行加强免疫，并每隔2~3周进行1次。初次免疫和每次加强免疫之后，都需要进行动物采血并测定抗体效价。当抗体效价达到预期水平时，即可放血制备抗血清。
步骤3：抗体纯化
对于多克隆抗体的制备，亲和纯化是一种高效的纯化方法。
蛋白A/G亲和纯化可从抗血清富集免疫球蛋白G（IgG），并且除去大量不需要的蛋白。但产品仍然有大量非特异性IgG的存在，可能导致在各种ELISA、免疫组织化学和蛋白质免疫印迹等免疫检测中背景偏高。
为了从抗血清中分离出特异性多克隆抗体，通常使用抗原特异性亲和纯化。抗原亲和纯化可除去大量非特异性IgG组分，并且富集与目标抗原发生特异性反应的免疫球蛋白组分。
步骤4：质量控制
纯化后，抗体需要经过一系列QC检测，以确保多克隆抗体的质量。抗体浓度测定是在280nm（A280）测定其OD值。使用SDS-PAGE电泳用于检测多抗的纯度。ELISA法可用于测定多克隆抗体的效价。根据下游检测需求，可对抗体进行标记，用于IHC、WB、ELISA等实验。