抗绿色荧光蛋白(GFP)抗体，小鼠单克隆

 

GFP（Green fluorescent protein，绿色荧光蛋白）标签含有 238 个氨基酸，分子量约为 26.9 KDa，是 1962 年下村修等在维多利亚多管发光水母（Aequorea victoria）中发现的。GFP 标签在紫外线的照射下会发出绿色的荧光，而且与靶蛋白融合后不会显著地影响天然蛋白质的组装和功能。

 

凭借 10 多年在蛋白表达和抗体制备领域的技术积淀，义翘神州自主研发了多款抗 GFP 标签抗体。高品质的抗 GFP 标签抗体可用于检测 GFP（绿色荧光蛋白），满足多种应用的需求，包括蛋白印迹（WB）、ELISA 或免疫沉淀（IP）。

 

特异性：单克隆抗绿色荧光蛋白（GFP）识别N末端和C末端GFP（27 kDa）标记的融合蛋白。抗体与原核表达载体表达的融合蛋白反应。

 

免疫原：GFP标记的融合蛋白

 

生化/生理作用：GFP (绿色荧光蛋白)是一种用于检查基因表达和蛋白定位的分子。GFP 用紫外线/蓝光激发时会发出绿光。GFP 荧光保持稳定，可在活细胞中进行无创检测。GFP 被认为是监测几种活细胞或生物体动态过程的工具。当在真核细胞或原核细胞中表达并被蓝光或紫外光照射时，GFP 产生明亮的绿色荧光。

 

外形：0.01 M 磷酸盐缓冲液 (pH 7.4)，含 15 mM 叠氮化钠

 

储存及稳定性：如需连续使用，请在2-8°C下储存，长一个月。若需延长储存时间，可将溶液分装并冷冻。不建议反复冻融。如果长期储存时出现轻微浑浊，请在使用前通过离心澄清溶液。若工作稀释样品在12小时内未使用完，则应丢弃。

 

 

该如何选择表达克隆的标签

 

1、首先，需要确定融合标签的目的

 

蛋白纯化 ：标签的普遍用途是蛋白纯化。小分子6XHis Tag常被用于细胞内源蛋白的纯化。6XHis Tag也广泛应用于大肠杆菌的蛋白纯化。可是哺乳动物细胞中因非分泌蛋白自身存在高组氨酸背景，因此极少使用6XHis Tag。

 

Western Blot检测：若需要做Western Blot实验来检测细胞裂解物中蛋白的表达，你可以选择有匹配的抗体的小分子标签。FLAG Tag以其分子量小以及拥有许多与之匹配的商业化的抗体等优势，成为Western Blot实验中常用的Tag。

 

免疫沉淀反应：FLAG Tag其分子量小以及拥有大量相匹配的商业用抗体等优势成为免疫沉淀反应中常用的Tag. 其他常用的标签有：HA和cMyc.

 

免疫共沉淀。首先，裂解您的样本，以释放蛋白。向试管中添加裂解液的同时，加入靶向融合标签的抗体，抗体会识别融合标签。然后抗体与蛋白 A 或 G 偶联微珠结合，后者拉出您的目标蛋白，以及与之复合的其他蛋白。

 

活细胞成像：荧光蛋白（Fluorescent Proteins, FPs）是活细胞成像常用的标记蛋白。其中常用的是绿色荧光蛋白（GFP）和它的衍生物（CFP, YFP, etc.），以及一些红色变体，如dTomato和mCherry.

 

2、考虑融合标签的影响

 

任何一类标签处于氨基酸序列的任一位置，都具有影响目的蛋白表达或功能的可能性。主要原因是标签可能会干扰蛋白的正确折叠，致使目的蛋白失活或形成包涵体。其次，标签可能会中断亚细胞定位信号，这种情况下，蛋白能够正确翻译和折叠，但在细胞内所处的位置是错误的。因此，您需要知道添加的标签对目的蛋白的表达是否有影响。

 

3、考虑是在N-端还是C-端标记

 

N-端或C-端标记的选择还需要根据蛋白结构、定位等特性。然而，倘若你没有确切的蛋白结构，或蛋白功能域图谱，建议分别构建N-端标记和C-端标记的表达克隆，以检测哪个更有效。

 

重组蛋白表达技术现已在生物学各个具体领域应用广泛，尤其是蛋白质的大规模生产和体内功能研究都需要应用重组蛋白表达载体。

 

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