单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合为既能稳定生长又能产生抗体的杂交瘤细胞。单克隆抗体具有理化性状高度均一（纯度高、有效抗体含量高）、生物活性单一、与抗原结合特异性强、来源容易、制备成本低等优点，并且可用于疾病的诊断和治疗。

    单克隆抗体制备原理：

    抗体主要由B淋巴细胞合成。每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞可以合成不同的抗体。当机体受外界抗原刺激后，可诱发免疫反应，产生相应的抗体，即单克隆抗体。B淋巴细胞能够产生抗体，但在体外不能进行无限分裂；肿瘤细胞在体外培养的条件下可以无限传代，是“”的细胞，但不能产生抗体。因此将骨髓瘤细胞与经免疫过的小鼠的脾细胞在聚乙二醇等介导下发生融合，融合后的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，一方面可以分泌特定的抗体，另一方面也具备了肿瘤细胞无限增殖的能力，可在体外培养条件下或移植到体内无限增殖，从而分泌大量单克隆抗体。

    单克隆抗体制备的基本流程

    （1）免疫动物

    免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

    （2）细胞融合

    采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

    （3）选择性培养

    选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

    （4）杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化

    在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

    单克隆抗体的制备流程图3单克隆抗体的制备流程

    （5）单克隆抗体的制备

    单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法：

    ①体内诱生法取Balb/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降脂烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得单克隆抗体。

    ②体外培养法将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。近年来，新型培养技术和装置不断出现，提高了抗体的生产量。杂交瘤细胞融合后，要进行筛选后才能使用。杂交瘤细胞分为两次：是筛选出杂交瘤细胞；另是在初选的杂交瘤细胞中筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，这两次筛选的方法和原理各不相同。

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