膜蛋白表达是生物学和医学领域中一个重要的研究课题，但很多人对此并不十分了解。本文将为大家解答关于膜蛋白表达的常见问题，帮助大家更好地理解这一领域的基本概念、研究方法和应用前景。

 

Q1:义翘神州膜蛋白VLP平台是利用什么系统表达的？

A1:VLP平台我们采用的是HEK293细胞表达的，获得的蛋白更接近天然构象，更有利于客户进行后续的研究和应用。

 

Q2:膜蛋白VLP产品可以做体内生物素标记吗？

A2:可以的，可以选择在蛋白上加AVI标签或者选择对VLP本身生物素化，体内定点生物素标记，具体根据您的需求选择。

 

Q3:抗体与抗原结合在胞外，全长的多次跨膜蛋白意义大吗？

A3:多次跨膜蛋白在细胞膜上多次跨越，在胞外形成多个胞外区，比如Claudin18.2、CD20、CD133都有两个ECL（extracellular loops），每个ECL都有特定功能甚至会相互影响。全长可以保证蛋白构象天然完整，而且ECL展现完全，帮助筛选靶向多次跨膜蛋白抗原的理想抗体。给大家看下面两张图，全长的意义就显而易见了，结构完整，功能上也有保证。这么看，全长也不是我们ACRO一直在强调全长，而是客户需要全长的多次跨膜蛋白，满足客户需要的产品是ACRO的初衷。我们也比较过，单独的胞外ECL区蛋白活性确实比全长蛋白差。

 

Q4:相比其他非Nanodisc产品，Nanodisc有什么好处吗？

A4:Nanodisc-膜蛋白与去垢剂-膜蛋白相比，的确有不同。首先，原理上，Nanodisc膜蛋白是将膜蛋白除去去垢剂之后组装在类细胞膜的Nanodisc上。其次，应用上，我们都知道，去垢剂会溶膜从而对细胞产生损伤，Nanodisc版本的膜蛋白因不含去垢剂，可以进一步扩展到用于细胞试验、CAR阳性率检测，应用范围是更广的。另外，我们ACRO使用的Nanodisc技术已经获得持有方的授权，在研发过程中是可以放心使用的。

 

Q5:VLP和Nanodisc平台下的多次跨膜蛋白怎么去除非特异抗体？

A5:非特异抗体的影响不容忽视，使用VLP和Nanodisc平台下的膜蛋白的确可能产生非特异抗体，我们这两个平台均有对应的用于反筛去除非特异抗体的空白对照：VLP-膜蛋白有同型对照产品空白VLP；Nanodisc有两款MSP1D1空白产品，其中一款MSP1D1作为tag free 膜蛋白的同型对照，如果使用生物素化的Nanodisc-膜蛋白，另一款MSP1D1可以作为同型对照。

 

Q6:VLP相关蛋白能适合冻干保存吗？VLP的用于免疫有什么注意事项？比如能否乳化，对佐剂类型有没有要求？

A6:包膜VLP产品我们目前都是液体-70°C保存，干冰发货；非包膜VLP我们是冻干保存的。VLP免疫主要是需要注意佐剂量的选择，因为VLP本身是可以增强免疫原性的，跟常规蛋白不同。

 

Q7:VLP和Nanodisc产品稳定性如何。冷冻长时间保存可以吗？

A7:VLP和Nanodisc本身的稳定性是很好的，是可以在-70°C长期保存的。

 

Q8:如何确认VLP-Claudin18.2表达的是该目标蛋白，纯度如何评估？产品上的电镜图片，怎么确认颗粒上有该蛋白?

A8:Claudin18.2-VLP 我们会通过anti-Claudin18.2特异性的抗体进行检测验证。纯度我们通过电泳/HPLC/DLS电镜进行评估。常规负染电镜因分辨率低是没办法看到VLP上是否有Claudin18.2的。

 

义翘神州搭建了基于HEK293表达系统的VLP（virus-like particle）技术平台，能够将目的膜蛋白完整展示在VLP表面，使其能够像普通蛋白一样进行检测，已上线的Claudin 18.2、GPRC5D、Claudin 6等产品均展示出良好活性。义翘神州目前可以为客户提供膜蛋白定制服务，助力药物研发进程。