核酸酶(SuperNuclease)是一种来自于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),经基因工程改造的核酸内切酶。可降解双链、单链、线状、环状的DNA和RNA,完全将核酸降解成3~5个碱基长度的5'-单磷酸寡核苷酸。义翘神州不仅可以提供研究级核酸酶,依托于ISO 13485和GMP体系,还可提供高效、高质量、应用广的GMP级别核酸酶。同时我们提供核酸酶残留检测试剂盒,在解决生物制品核酸污染的同时,有效降低酶本身的残留风险。下面通过问答形式向大家详解核酸酶:

Q: 如何处理粘附细胞?

A: 用PBS洗涤后,向100μL RIPA裂解物(或其他哺乳动物细胞裂解物)中加入1-5μL核酸酶,在室温下孵育30min,收集裂解物,离心上清液进行下游实验。

 

Q: 如何处理悬浮细胞?

A: 离心收集悬浮细胞后,将100μL RIPA裂解物(或其他哺乳动物细胞裂解物)加入含有1-5μL核酸酶的离心管中,在室温下孵育30min,收集裂解物,离心上清液进行下游实验。

 

Q:  如何处组织样本呢?

A: 研磨30~100mg动植物组织后,加入100~200μL裂解液和1~5μL核酸酶,室温孵育30min,收集裂解液并离心上清液进行下游实验。

 

Q: 大肠杆菌或其他细菌呢?

A: 离心收集细菌后,裂解液或研磨破碎后,每100μL加入1~5μL核酸酶,室温孵育30min,收集裂解液,离心上清液进行下游实验。

 

Q: 如何稀释

A: 正常推荐稀释比(终浓度)为1:1000~1:20000,其中时间、温度和稀释比是影响反应的积极因素。

 

Q: 是否用PBS稀释

A: 是

 

Q: 你能减少剂量吗

A: 如果你想减少剂量,可以适当提高反应温度或延长反应时间

 

Q: 反应辅因子

A: 必须向反应溶液中加入2-5mM Mg2+

 

Q: 反应缓冲液

A: 常用的生物缓冲液,如TBS、MOPS(pH6-8)等

 

Q: 稀释后每次使用多少?如何测试梯度?一开始多少钱?

A: 根据不同的实验要求,添加量可以在1/100和1/10000之间。真核细胞所需的量高于原核细胞,因为真核细胞的核酸含量高,并且可以按照1/1000的比例添加真核细胞初始添加量,可以按照1/10000的比例添加原核细胞。由于核酸酶活性在室温下较高,因此在4℃下消化的DNA添加比例高于室温下。普通的CoIP实验、蛋白质表达实验可以适当地略微增加,并且可以按照1/100的比例添加对DNA残基要求高的实验。

 

Q: 如何灭活核酸酶?如何移除?

A: EDTA螯合金属离子的使用可以可逆地抑制核酸酶的活性,极端条件下可以引起不可逆的失活,如100mM NaOH和70℃处理30min。可以通过阴离子交换柱或气相色谱法从目标产物中分离核酸酶。由于这种核酸内切酶的高稳定性,建议不要在终产物需要排除核酸酶的应用中使用核酸内切酶。

 

Q: 储存条件

A: 储存温度为-20℃。储存缓冲液:20mM Tris-HCl pH 8.0,50mM NaCl,2mM MgCl2,50%甘油。

 

 

Q: 核酸酶应用

A:

1、蛋白质提取过程中核酸污染的去除:当重组蛋白质纯化或哺乳动物细胞裂解物下游需要低粘度时,核酸酶可用于降低样品粘度,以便于操作;

2、有效减少储存的外周血单个细胞(PBMC)的聚集;

3、有利于不溶性蛋白在复性前的高质量包合体系制备;

4、有效去除带负电荷核酸对双向SDS-PAGE蛋白样品的影响;

5、在宽范围的条件下(6M尿素、0.1M盐酸胍、0.4%Triton X100、0.1%SDS、1mM EDTA、1mM PMSF),降解所有形式的(双链、单链、线性、环状)DNA和RNA;

6、根据美国食品药品监督管理局的核酸污染去除程序,去除蛋白质产品中的污染;

7、本品可与多种细胞细菌裂解液配合使用,去除粗提液中的核酸,降低溶液粘度,提高蛋白质产量。

 

义翘神州提供不同级别核酸酶,GMP级条件下生产的核酸酶SuperNuclease,无动物源性,可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。超高活性,应用场景广泛且使用量低不易残留,质量、性能、供货能力可靠,并已完成在FDA的药物主文件申报备案(DMF Number#:35978),满足药物申报的规范。

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