实时定量聚合酶链反应 (Quantitative Real-time PCR，qPCR) 是一种分子生物学技术，用于放大和同时检测或量化靶向DNA分子。程序遵循PCR的一般原则。在PCR反应过程中，随着循环次数的增加，PCR产物的积累导致荧光信号的增强。因此，通过监测荧光强度，在"实时"中检测到PCR反应的进展。科学研究中较为常用的是SYBR Green qPCR和TaqMan探针qPCR。
实时荧光定量PCR（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）分类：
①TaqMan荧光探针（Real-time PCR，QPCR，荧光定量）
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5‘-3‘外切酶活性将探针酶切降解，使荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
②SYBR Green荧光染料法：Real-time PCR|QPCR
SYBR Green是一种DNA结合染料，能非特异地掺入到双链DNA中去。在游离状态下，它不发出荧光，但一旦结合到双链DNA中以后，便可以发出荧光。在Real-time PCR|QPCR实验中它的优点就是可以与任意引物、模板相配合，用于任意反应体系中。从经济角度考虑，它也比其它的探针的Real-time PCR|QPCR价格要便宜得多。但由于它能与所有的双链DNA结合，所以一旦反应体系中出现非特异扩增，那它就会影响到定量结果的可靠性与重复性。要避免这种不利因素，可以通过选择良好的引物并优化反应条件以消除非特异性影响。
荧光定量PCR的操作步骤可以简单概括为：RNA 提取 → 反转录 → 设计引物 → Q-PCR。
目前义翘神州提供实时定量PCR分析服务内容：
一、SYBR Green dye法：(1-2周)
具体步骤
? 引物设计与合成
? qPCR检测
? 数据分析
交付内容
? 分析
? 剩余引物
二、TaqMan探针法（1-2周）
具体步骤
? 引物设计、合成与优化
? 探针设计与合成
? qPCR检测
? 数据分析
交付内容
? 分析
? 剩余引物及探针
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