单链抗体（scFv）概述

单链抗体（Single chain fragment variable, scFv）是一种基因工程抗体，在研究、诊断和临床应用等领域展示出广阔的前景。scFv的分子量约为28kDa，由抗体的重链（VH）可变区和轻链（VL）可变区通过一段10~25个氨基酸的柔性短肽（linker）连接而成。VH和VL各自包含3个互补决定区（CDR），即CDR1、CDR2和CDR3。由于CDR的氨基酸组成和排列顺序呈现高度多样性，故可形成许多种具有不同结合抗原特异性的抗体。VH与VL的6个CDR共同组成Ig的抗原结合部位，决定了一个抗体的特异性。

 

scFv结构

完整的抗体由两条重链（heavy chain，H）和两条轻链（light chain，L）构成，透过人工改造，可使其只表达可变区，通过人工合成的连接肽（Linker）基因将抗体重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）连接成重组基因，由该重组基因表达的抗体就称为单链抗体（scFv）。在结构上，可以将重链的N端与轻链的C端相连，也可以将轻链的N端与重链的C端相连。Linker长度通常为15~25个氨基酸，通常由甘氨酸（Gly）和丝氨酸（Ser）构成，具有一定弹性及蛋白酶抗性，Linker的作用是连接VH，VL，并保持一定的弹性，使VH，VL的功能区折叠后仍可配对，构成单价抗原结合位点。

 

scFv单链抗体制备

噬菌体展示技术是一种将scFv单链抗体或Fab抗体展示于噬菌体表面的抗体库制备技术，已广泛应用于抗原表位分析、抗体人源化、药物筛选、单克隆抗体制备和疫苗开发等领域。

 

scFv单链抗体的制备流程：首先从杂交瘤（或脾脏、淋巴细胞和骨骼）中分离出mRNA，随后逆转录成cDNA，再经RT-PCR分别扩增抗体的重链及轻链基因，然后将抗体基因连入噬菌粒载体，构建scFv抗体库。利用生物淘选步骤，我们可获得具有高度亲和力和特异性的scFv抗体片段。

 

在抗体发现项目中，scFv抗体片段表达和制备是一项常规工作。抗体基因完成测序后，scFv抗体可在原核系统（如E. coli）中进行表达，也可以通过转染在哺乳动物系统（即HEK293细胞）中进行表达。义翘神州可根据客户的要求，在不同表达系统进行scFv抗体片段的制备。

 

常用的纯化标签为poly-histidine标签、FLAG标签、HA标签和Myc标签等。通常，将合适的纯化标签添加至scFv抗体片段的C端，另外，在设计表达载体时可在纯化标签和Fab之间加上蛋白酶切位点，方便后续纯化后去除标签。

 

scFv抗体表达服务详情:

宿主细胞：

E. coli、酵母或HEK293

制备：

重组技术

-E. coli发酵：可溶性表达

-酵母发酵：分泌蛋白表达

-哺乳动物细胞瞬时转染

 

纯化方法

? His标签、FLAG标签亲和纯化

? 阴离子和阳离子交换层析

? 分子筛（SEC）

纯化标签:

6-10 His标签、FLAG标签、SUMO标签等（根据客户要求）

周期:

3~6周（从收到基因序列到产品交付）

交付产品:纯化scFv抗体（按照客户注明的数量进行交付）

质量标准:按照客户要求（根据质量要求调整报价）

抗体类型:人、小鼠、大鼠、兔、犬、恒河猴的IgG抗体

应用:药物发现：抗体-抗原共结晶、抗体结合表位

价格:立即询价

 

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