FLAG标签蛋白纯化原理：

 

Flag标签蛋白纯化是一种常用的蛋白质纯化方法，它利用Flag标签的特殊性质，将目标蛋白质与Flag标签结合，然后通过特定的亲和层析柱进行纯化。

 

FLAG标签（或称为FLAG八肽、FLAG表位）是为融合蛋白设计的个表位标签，也是获得的标签。DYKDDDDK-tag（FLAG标签）的分子量为1012Da。FLAG标签中的多聚阴离子氨基酸不太可能影响靶蛋白的活性。FLAG标签可以进行包含低非特异性背景的高度特异性pull-down实验。

 

一个FLAG标签可以用于多个需要抗体识别的不同检测中。如果没有针对某个蛋白的抗体，在蛋白上添加一个FLAG标签就可以用针对FLAG序列的抗体来研究该蛋白。

 

 

FLAG标签蛋白的纯化过程主要包括以下几个步骤：

 

1.制备含有FLAG标签蛋白的细胞提取物或培养上清液。

2.将细胞提取物或培养上清液加入固相上的抗FLAG抗体。抗体可固定在各种载体上，如琼脂糖、磁珠等。

3.通过洗涤和洗脱等步骤，将非特异性结合的蛋白质去除，留下特异性结合的flag标签蛋白。

4.进行浓缩、纯化等后续处理，得到高纯度的flag标签蛋白。

FLAG标签蛋白纯化的优点在于操作简便、可重复性好、产量高、效果稳定等，是一种常用的蛋白质纯化方法。

 

FLAG标签在重组蛋白生产中的应用：

 

在蛋白的N端或C端添加FLAG标签，通过使用与琼脂糖珠结合的FLAG标签特异性单克隆抗体，可以快速纯化过度表达的重组蛋白。

在过去商品化的FLAG标签亲和纯化树脂非常昂贵且只能使用几次。经过多年的开发，义翘神州已开发出一种卓越的FLAG 标签特异性单克隆抗体，可用于各种检测应用，也可与琼脂糖结合进行亲和纯化。改进后的FLAG标签亲和树脂价格合理，并且可以耐受低pH的洗脱，从而延长树脂的寿命。

 

此外，可以通过ELISA和Western blot等方法，用FLAG标记特异性抗体来检测细胞培养液中的标签蛋白表达水平。